Лабораторная работа № 7 Свойства белков Цветные реакции на белки и аминокислоты. || Биуретовая реакция на белки

Цветные реакции на белки Опыт 1. Биуретовая реакция.

Название
реакции

Применяемые
реактивы

Появление
окрашивания

Что
открывает данная реакция

1

Биуретовая
и т.д.

Выводы

Биуретовая
реакция
– качественная на все без исключения
белки,
а также продукты их неполного гидролиза,
которые содержат не менее двух пептидных
связей.

Принцип
метода. Биуретовая реакция обусловлена
присутствием в белках пептидных связей
(- СО – NH
-), которые в щелочной среде образуют с
сульфатом меди (ІІ) окрашенные в
красно-фиолетовый цвет медные солеобразные
комплексы.
Биуретовую реакцию дают также некоторые
небелковые вещества, например биурет
(NH2-CO-NH-CO-NH2),
оксамид
(NH2CO-CO-NH2),
ряд аминокислот
(гистидин,
серин,
треонин,
аспарагин).

Порядок
выполнения работы.

К
1 мл исследуемого 1% раствора белка
добавляют равный объем 10 % раствора
гидроксида
натрия
(NaOH) щелочи и затем 2-3 капли 1 % раствора
сульфата
меди
(CuSO4).
разбавленного, почти бесцветного
раствора медного купороса.

При
положительной реакции появляется
фиолетовая окраска с красным либо синим
оттенком.

Опыт 2. Реакция на «слабосвязанную серу».

Лабораторная работа № 7 Свойства белков Цветные реакции на белки и аминокислоты. || Биуретовая реакция на белки

Принцип
метода. Это
реакция на цистеин и цистин. При щелочном
гидролизе «слабосвязанная сера» в
цистеине и цистине достаточно легко
отщепляется, в результате чего образуется
сероводород, который, реагируя со
щелочью, дает сульфиды натрия или калия.
При добавлении ацетата свинца(II)
образуется осадок сульфида свинца(II)
серо-черного цвета.

В
пробирку наливают 1 мл неразбавленного
куриного белка,
прибавляют 2 мл 20%-го раствора гидроксида
натрия. Смесь осторожно
кипятят (чтобы смесь не выбросило).

ацетат
свинца

плюмбит
натрия

В
пробирку наливают 1 мл. неразбавленного
куриного белка добавляют 2 мл.
концентрированного раствора щелочи,
кладут несколько кипятильников. К
горячему раствору добавляют раствор
плюмбита натрия – образуется желто-бурое
или черное окрашивание. (Плюмбит натрия
готовят следующим
образом: к 1 мл уксуснокислого свинца
добавляют раствор щелочи по каплям до
растворения образующего вначале осадка
гидроксида свинца).

Pb(CH3COO)2
2NaOH Pb(OH)2
2 CH3COONa,

Pb(OH)2
2NaOH Na2PbO2
H2O,

Na2S
Na2PbO2
2H2O
PbS 4NaOH.

Оформление
опыта: сделать
вывод и
написать уравнение реакции.

Опыт 5. Нингидриновая реакция.

‑аминокислота

нингидрин

альдегид

восстановленная
форма
нингидрина
(гидриндантин)

продукт
конденсации сине-фиолетового цвета

Реакция
с нингидрином используется для визуального
обнаружения a-аминокислот на хроматограммах
(на бумаге, в тонком слое), а также для
колориметрического определения
концентрации аминокислот по интенсивности
окраски продукта реакции.

Продукт
этой реакции содержит в своем составе
радикал (R)
исходной аминокислоты, который
обусловливает различную окраску:
голубую, красную, и т.д. соединений,
возникающих при реакции аминокислот с
нингидрином.

В
настоящее время нингидриновая реакция
широко используется как для открытия
отдельных аминокислот, так и для
определения их количества.

В
пробирку наливают 1 мл 1-10%-го разбавленного
раствора белка куриного яйца и 1-2 мл
1%-го раствора нингидрина в ацетоне.
Содержимое пробирки перемешивают и в
течение 2-3 мин осторожно нагревают на
водяной бане до появления сине-фиолетового
окрашивания, свидетельствующее о
присутствии в белке α-аминокислот.

Оформление
опыта: сделать
вывод и
написать уравнение реакции.

Опыт 2. Высаливание белков хлоридом натрия и сульфатом магния.

Лабораторная работа № 7 Свойства белков Цветные реакции на белки и аминокислоты. || Биуретовая реакция на белки

Принцип
метода. Для
высаливания белков
из растворов применяются хлорид натрия,
сульфат натрия, ацетат натрия, сульфат
магния, ацетат калия, хлорид кальция,
нитрат кальция и сульфат аммония.
Некоторые из перечисленных солей
высаливают белки не только при насыщении
ими раствора; определенные белки
высаливаются и при достаточно низких
концентрациях солей.

Белки
состоят из аминокислот и поэтому обладают
амфотерными свойствами. При растворении
белков в воде ион водорода,появляющийся
в результате диссоциации карбоксильной
группы, присоединяется к аминогруппе.
Поэтому белковые молекулы несут как
положительные, так и отрицательные
заряды. Величина заряда определяется
количеством ионогенных групп.

При
определённом значении рН суммарный
электрический заряд молекулы белка
становится равным нулю. Такое значение
рН называется изоэлектрической
точкой
(рJ). В изоэлектрической точке растворы
белков имеют минимальную устойчивость,
поскольку они лишены основного
стабилизирующего фактора – заряда и
поэтому легко выпадают в осадок.

Осаждение
белков NaCl
и MgSO4 — Хлорид натрия и сульфат магния в
отличие от сульфата аммония осаждают
глобулины из насыщенного раствора. В
изоэлектрической точке глобулины этими
же солями осаждаются при более низкой
концентрации.

В
2 пробирки наливают по 5 мл 1% раствора
белка, прибавляют при перемешивании до
полного насыщения (когда часть кристаллов
остается нерастворённой, несмотря на
взбалтывание) в одну пробирку тонко
измельченного хлорида натрия, в другую
– сульфата магния. Через несколько
минут в двух пробирках появляется осадок
глобулинов.

В
водном растворе белков их частицы
являются заряженными и сильно
гидратированными, что обуславливает
устойчивость белковых растворов. Но
при высокой концентрации солей, ионы
которых тоже сильно гидратированы,
происходит разрушение водных оболочек
белковых молекул и снимается заряд с
белковой молекулы адсорбирующимися на
ней ионами соли.

Лабораторная работа № 7 Свойства белков Цветные реакции на белки и аминокислоты. || Биуретовая реакция на белки

В
результате этих двух процессов белковые
растворы теряют устойчивость, частицы
белка слипаются друг с другом, укрупняются
и, наконец, выпадает осадок.

Оформление
опыта: полученные результаты опыта
записать в тетрадь и сделать
вывод.

Adblock detector